高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
高效液相色譜儀在醫(yī)藥領(lǐng)域有作用呢?
1.藥物生產(chǎn)中進行中間控制:生產(chǎn)抗菌素時,首先要了解發(fā)酵液中的主體與付產(chǎn)物的存在情況。例如:青霉素、四環(huán)素、頭孢子菌素、紅霉素、柔紅霉素、慶大霉素等的發(fā)酵產(chǎn)物,均可用C18柱和甲醇及緩沖液配制的流動相或用離子對法,分析主體及其收產(chǎn)物的含量。對普魯卡因酰胺、茶堿等可進行主體含量的測定,對硝酸甘油可測定主體含量及其降解產(chǎn)物,以便保證藥物的熱量。
2.分離分析藥物的組分含量:由于一種藥劑常含有多組分,一次即可將各維生素B6、D1、A、E同時分離并定出含量。又如止痛藥或退燒藥也可用此法分離并測得各組分的含量。
3.測定藥物在各種器官中的代謝產(chǎn)物:特別是研究藥物的代謝產(chǎn)物在血清中存在的情況。如測血清中的酮酸及戊二酸。測尿中代謝產(chǎn)物更為方便,不需要繁鎖的預(yù)處理。因為研究尿中的組分能鑒別病人的代謝功能,對病理研究或監(jiān)床診斷均具有重要的參考價值。
4.分析藥物在體內(nèi)的殘量:這是近來研究新藥效能很主要的內(nèi)容之一,如冬凌草甲素是植物中的一組分,有抗癌效果,但是毒性大。測定其在血清中含量很重要,現(xiàn)在可用C18柱及甲醇水為流動相,測定處理后的血清樣品,即可得到血中的含量。如磺胺類藥品在血清及尿中含量也不允許太大,可用C18柱及酸性乙醇為流動相,測定含量后,則可估計最合適的用藥劑量。又如四環(huán)素、巴比妥酸、止痛藥、退燒藥、護糖尿病的藥物等,在血或尿中的含量都可用C18柱用甲醇、水為流動相來測定含量。因此,反相色譜法應(yīng)用范圍極廣。